WAY-600
WAY-600是一种有效的，ATP竞争性的，选择性的mTOR抑制剂，IC50为9 nM；抑制mTORC1/P-S6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473)，但不抑制P-AKT(T308)；作用于mTOR比作用于PI3Kα(>100倍)和PI3Kγ(>500倍)选择性高。
WAY-600 Chemical Structure
CAS: 1062159-35-6
产品质控
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生物活性
| 产品描述 | WAY-600是一种有效的，ATP竞争性的，选择性的mTOR抑制剂，IC50为9 nM；抑制mTORC1/P-S6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473)，但不抑制P-AKT(T308)；作用于mTOR比作用于PI3Kα(>100倍)和PI3Kγ(>500倍)选择性高。 | ||
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| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | 免疫复合物激酶试验表明mTORC2-特异性底物His6-AKT或mTORC1底物His6-S6K被WAY-600剂量依赖性抑制。在细胞模型中，WAY-600剂量依赖性完全抑制mTOR信号和AKT功能。在MDA361，人乳腺癌细胞中，WAY-600显著抑制cap-依赖性和总体蛋白质合成。WAY-600在各种癌细胞系中表现出抗增殖活性，包括G1细胞周期阻滞和选择性细胞凋亡。在U87MG，MDA361 和LNCap 细胞中，WAY-600下调血管生成因子，VEGF和HIF-1α。[1] | |||
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| 激酶实验 | 纯化的 FLAG-TOR 的 DELFIA 测定 | |||
| 纯化FLAG-TOR (FL和3.5)的常规试验在96孔板中如下进行。酶先在激酶缓冲液(10 mM Hepes (pH 7.4)，50 mM NaCl，50 mM β-甘油磷酸盐，10 mM MnCl2，0.5 mM DTT，0.25 lM 微囊藻素LR，和100 lg/mL BSA)中稀释。对每个孔，12 μL稀释的酶与0.5 μL测试抑制剂或对照组载体二甲基亚砜(DMSO)简单混合。激酶反应通过加入包含ATP和His6-S6K 的12.5 μL激酶试验缓冲液起始，终反应体积为25 μL，包含800 ng/mL FLAG-TOR，100 μM ATP，和1.25 μM His6-S6K。反应板在室温下温和振荡培育2小时(在1–6 小时为线性)，随后加入25 μL停止缓冲液(20 mM Hepes (pH 7.4)，20 mM EDTA，和20 mM EGTA)终止反应。磷酸化(Thr-389) His6-S6K的DELFIA检测在室温下使用铕-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu每个抗体)标记的单克隆抗- P(T389)-p70S6K抗体(1A5)进行。45μl终止的激酶反应混合物转移到包含55 μL PBS的MaxiSorp板。将孔抽吸并用PBS洗涤一次后，His6-S6K附着2小时。加入100μL DELFIA缓冲液与40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K抗体。抗体结合在温和搅拌下继续1小时。随后将孔抽吸，并用包含0.05% Tween 20 (PBST)的PBS洗涤4次。将100μL DELFIA增强液加入每孔，板在PerkinElmer Victor模型酶标仪上读取。获得的数据用于计算酶活性和潜在抑制剂对酶的抑制作用。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | MDA361，U87MG，HCT116，LNCap 和 HT29 细胞 | ||
| 浓度 | 0-100 μM | |||
| 孵育时间 | 24 或 48 小时 | |||
| 方法 | 对于细胞周期分析，将细胞以10,000细胞/孔的密度接种于96孔板，培养24小时，用不同抑制剂处理24小时或48小时。处理后，采集细胞，用PBS洗涤，并于-20 °C在70%乙醇中固定过夜。洗涤细胞，用碘化丙啶着色，并根据Guava细胞周期方案在Guava PCA-96仪器上分析细胞周期构成(得到5000 细胞/孔)。 | |||
化学信息&溶解度
| 分子量 | 494.59 | 分子式 | C28H30N8O |
| CAS号 | 1062159-35-6 | SDF | Download WAY-600 SDF |
| Smiles | C1CN(CCC1N2C3=C(C=N2)C(=NC(=N3)C4=CC5=C(C=C4)NC=C5)N6CCOCC6)CC7=CN=CC=C7 | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 22 mg/mL ( (44.48 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Ethanol : 2 mg/mL (4.04 mM) Water : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
mg/kg
g
μL
只
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
% DMSO
%
% Tween 80
% ddH2O
%DMSO
%
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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