WYE-687
WYE-687是一种ATP竞争性的，选择性的mTOR抑制剂，IC50为7 nM；抑制mTORC1/pS6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473)，但不抑制P-AKT(T308)，作用于mTOR比作用于PI3Kα(>100倍)和PI3Kγ(>500倍)选择性高。
WYE-687 Chemical Structure
CAS: 1062161-90-3
产品质控
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生物活性
| 产品描述 | WYE-687是一种ATP竞争性的，选择性的mTOR抑制剂，IC50为7 nM；抑制mTORC1/pS6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473)，但不抑制P-AKT(T308)，作用于mTOR比作用于PI3Kα(>100倍)和PI3Kγ(>500倍)选择性高。 | ||
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| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | 免疫复合物激酶试验表明mTORC2特异性底物His6-AKT或mTORC1底物His6-S6K被WYE-687剂量依赖性抑制。WYE-687剂量依赖性广泛抑制细胞模型中mTOR信号和AKT功能。在MDA36和人乳腺癌细胞中，WYE-678显著抑制cap依赖性总体蛋白质合成。WYE-687在各种癌细胞系表现出抗增殖作用，包括G1细胞周期阻滞和选择性细胞凋亡作用。在U87MG，MDA361和LNCap 细胞中，WYE-687下调血管生成因子，VEGF和HIF-1α。[1] | |||
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| 激酶实验 | 纯化的FLAG-TOR的DELFIA测定 | |||
| 纯化的FLAG-TOR (FL和3.5)常规试验在96孔板中如下进行。酶首先在激酶缓冲液(10 mM Hepes (pH 7.4)，50 mM NaCl，50 mM β-甘油磷酸盐，10 mM MnCl2，0.5 mM DTT，0.25 lM 微囊藻素LR，和100 lg/mL BSA)中稀释。对每个孔，12 μL稀释的酶与0.5 μL测试抑制剂或对照组载体二甲基亚砜(DMSO)简单混合。激酶反应通过加入包含ATP和His6-S6K的12.5 μL激酶试验缓冲液起始，得到包含800 ng/mL FLAG-TOR，100 μM ATP，和1.25 μM His6-S6K的25 μL终反应体积。反应板在室温下温和振荡培育2小时(1-6 小时时呈线性)，然后加入25 μL 终止缓冲液(20 mM Hepes (pH 7.4)，20 mM EDTA，和20 mM EGTA)终止反应。磷酸化(Thr-389) His6-S6K的DELFIA检测在室温下，使用铕-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu/抗体)标记的单克隆抗- P(T389)-p70S6K抗体(1A5)进行。55μL终止的激酶反应混合物转移到包含55 μL PBS的MaxiSorp板。将孔吸干，并用PBS清洗一次后，His6-S6K贴壁2小时。加入100 μL DELFIA缓冲液与40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K抗体。抗体结合在温和搅拌下继续进行1小时。然后将孔吸干，并用包含0.05% Tween 20 (PBST)的PBS清洗4次。将100 μL DELFIA增强液加入每孔，板在PerkinElmer Victor模型板读数器上读取。得到的数据用于计算酶活性和潜在抑制剂对酶的抑制活性。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | MDA361，U87MG，HCT116，LNCap 和 HT29 细胞 | ||
| 浓度 | 0-100 μM | |||
| 孵育时间 | 24或48小时 | |||
| 方法 | 对于细胞周期分析，细胞以10,000细胞/孔接种于96孔板，培养24小时，用不同浓度的抑制剂处理24小时或48小时。处理后，细胞被采集，用PBS洗涤，并于-20 °C在70%乙醇中固定过夜。将细胞洗涤，用碘化丙啶着色，并在Guava PCA-96仪器上根据Guava细胞周期协议分析细胞周期构成(需要5000 细胞/孔)。 | |||
化学信息&溶解度
| 分子量 | 528.61 | 分子式 | C28H32N8O3 |
| CAS号 | 1062161-90-3 | SDF | Download WYE-687 SDF |
| Smiles | COC(=O)NC1=CC=C(C=C1)C2=NC3=C(C=NN3C4CCN(CC4)CC5=CN=CC=C5)C(=N2)N6CCOCC6 | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
5%TFA : 3.04 mg/mL (5.75 mM) DMSO : 0.5 mg/mL ( (0.94 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Water : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
mg/kg
g
μL
只
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
% DMSO
%
% Tween 80
% ddH2O
%DMSO
%
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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