CP-466722
CP-466722是一种有效的，可逆的ATM抑制剂，不影响ATR，且抑制PI3K或PIKK家族成员。
CP-466722 Chemical Structure
CAS: 1080622-86-1
产品质控
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生物活性
| 产品描述 | CP-466722是一种有效的，可逆的ATM抑制剂，不影响ATR，且抑制PI3K或PIKK家族成员。 | ||
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| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | 在体外，CP-466722被认为是潜在的抑制剂，能够降低纯化ATM激酶使GST-p53(1–101)底物磷酸化的活性。此外，CP-466722也对abl 和src激酶表现出抑制活性。[1]在HeLa细胞中，6μM剂量的CP-466722通过可逆抑制电离辐射(IR)诱导的ATM激酶活性，导致ATM依赖性磷酸化被抑制。此外，在MCF-7人乳腺癌细胞和原代及永生化二倍体人成纤维母细胞中，ATM依赖性p53诱导也会被CP-466722抑制。[1] HeLa细胞中，响应IR，CP-466722增加G2/M 期细胞的DNA含量，并减少G1期细胞DNA含量。[1]在CP-466722下短暂暴露4小时，使HeLa细胞对IR敏感，而不影响细胞接种或细胞活性。[1] | |||
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| 激酶实验 | 体外激酶试验 | |||
| 采用体外激酶试验筛选小分子ATM激酶活性抑制剂，进行ELISA试验测量ATM下游靶点p53的磷酸化状态。重组GST-p53(1-101)和全长Flag标记的ATM & ATR纯化后用于ELISA和体外激酶试验。简而言之，Nunc 96孔Maxisorp板用2μg纯化的重组GST-p53(1-101)的PBS溶液涂覆过夜(4 °C)。所有随后的培养在室温下进行。用0.05%v/v-Tween/PBS洗涤平板，然后在CP-466722存在或不存在下加入包含纯化的重组全长ATM激酶的80μL终体积反应缓冲液(20 mM HEPES，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，10 mM MnCl2，1 mM DTT 和1 μM ATP)中。CP-466722 (10μM)重复两份加入板中，激酶试验培养90 min。将板用0.05%v/v-Tween/PBS洗涤，用1%w/v-BSA/PBS密封1小时并漂洗，然后将抗磷酸(Ser15)-p53 抗体(1:1000/PBS)加入板中，再培育1小时。为减少非特异性结合，先将板用0.05%v/v-Tween/PBS清洗，再与HRP-耦合的山羊抗兔子IgG二级抗体(1:5000/PBS)孵育1小时。连接到磷酸化GST-p53(1–101)蛋白质的二级抗体用TMB底物试剂检测。将板培育15-30分钟，停止反应(终浓度1 M H2SO4)，然后测定吸光度(λ=450nm)。在ELISA 试验中抑制ATM激酶活性的CP-466722，在体外激酶试验中能够抑制ATM/ATR激酶活性。使用抗磷酸(Ser15)-p53抗体的免疫印迹法读出ATM/ATR抑制情况。CP466722 (10 μM)对一组市售激酶的进一步作用分析通过Upstate进行。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | HeLa 和 A-T | ||
| 浓度 | 0-6 μM | |||
| 孵育时间 | 4 小时 | |||
| 方法 | HeLa或A-T (表达hTERT的GM02052)细胞以一式三份接种，培育24小时。细胞用IR (0-10Gy)预处理前，先用DMSO，CP466722或KU55933预处理。然后将细胞培育4小时，移除培养基，细胞用PBS清洗， 胰蛋白酶化，计数并重新接种(2000 细胞/板，10 cm 平板)在缺乏药物的培养基中，培育10天。在菌落计数前，将细胞清洗(PBS)，着色(PBS，0.0037%v/v-甲醛， 0.1%w/v-结晶紫)，漂洗(dH2O)并干燥。确定的群体(>50 细胞)以一个存活菌落计数，数据以存活菌落数相对于对照板+/− SE的百分比计算。 | |||
化学信息&溶解度
| 分子量 | 349.35 | 分子式 | C17H15N7O2 |
| CAS号 | 1080622-86-1 | SDF | Download CP-466722 SDF |
| Smiles | COC1=C(C=C2C(=C1)C(=NC=N2)N3C(=NC(=N3)C4=CC=CC=N4)N)OC | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
4-Methylpyridine : 5 mg/mL (14.31 mM) Warmed with 50°C water bath; DMSO : 0.28 mg/mL ( (0.8 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Water : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
mg/kg
g
μL
只
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
% DMSO
%
% Tween 80
% ddH2O
%DMSO
%
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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