PHA-767491 HCl

别名: CAY10572, NMS 1116354

目录号：S2742 Purity: 99.96%

PHA-767491 (CAY10572, NMS 1116354) HCl是一种有效的，ATP竞争性的，双重Cdc7/CDK9抑制剂，无细胞试验中IC50分别为10 nM和34 nM，比作用于CDK1/2和GSK3-β选择性高20倍左右，比作用于MK2和CDK5选择性高50倍，比作用于PLK1和CHK2选择性高100倍。

PHA-767491 HCl Chemical Structure

CAS: 942425-68-5

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相关化合物库	激酶抑制剂库 PI3K/Akt 抑制剂库 MAPK抑制剂库 DNA损伤/ DNA修复化合物库细胞周期化合物库	点击展开

细胞实验数据示例

细胞系	实验类型	给药浓度	孵育时间	活性描述	文献信息
human HeLa cells	Function assay	5 μM	24 h	Induction of apoptosis in human HeLa cells assessed as appearance of PARP at 5 uM after 24 hrs	18469809
NHDF	Function assay	5 μM	16 h	Induction of cell cycle arrest in thymidine deficient NHDF assessed as DNA synthesis in S-phase at 5 uM after 16hrs FACS analysis in presence of serum	18469809
human SF268 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SF268 cells after 72 hrs, IC50=0.86 μM	18469809
human HCT116 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT116 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=0.97 μM	18469809
human HCT16 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT16 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM	19115845
human SW403 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW403 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM	19115845
human A2780 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human A2780 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.07 μM	18469809
human SW48 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW48 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.2 μM	19115845
human MCF7 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human MCF7 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.3 μM	19115845
human U2OS cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human U2OS cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.49 μM	18469809
human COLO205 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human COLO205 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.5 μM	19115845
human OVCAR8 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human OVCAR8 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.56 μM	18469809
human L363 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human L363 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM	19115845
human NHDF cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NHDF cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM	19115845
human NCI-H929 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NCI-H929 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.8 μM	19115845
human SF539 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SF539 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.34 μM	18469809
human SW480 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SW480 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.67 μM	18469809
human Jurkat cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human Jurkat cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.2 μM	18469809
human HCT15 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT15 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.81 μM	18469809
human OPM2 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human OPM2 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=4.5 μM	19115845
human HT-29 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HT-29 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=5 μM	19115845
human K562 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human K562 cells after 72 hrs, IC50=5.87 μM	18469809
human NCI60 cells	Proliferation assay			Antiproliferative activity against human NCI60 cells, IC50=3.1 μM	18469809
U937 cells	Function assay			Inhibition of TNFalpha production in U937 cells, IC50=19 μM	17480064
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生物活性

产品描述

特性

PHA-767491是第一个通过控制 DNA 复制起始而不是延伸阶段而影响机制的抑制剂。

靶点

Cdc7 ^[1] (Cell-free assay)	CDK9 ^[1] (Cell-free assay)	GSK-3β ^[1] (Cell-free assay)	CDK2 ^[1] (Cell-free assay)	CDK1 ^[1] (Cell-free assay)	点击更多
10 nM	34 nM	220 nM	240 nM	250 nM	点击更多

体外研究(In Vitro)
体外研究活性	PHA-767491 20倍选择性作用于Cdk1, Cdk2 和 GSK3-β,50倍选择性作用于MK2和Cdk5，100倍选择性作用于 PLK1 和 CHK2。PHA-767491 抑制多种人类细胞系增殖，IC50为从作用于SF-268 细胞的0.86 μM 到作用于K562细胞的5.87 μM, 且按p53非依赖方式几乎显著诱导所有细胞凋亡，而5-FU 或Gemcitabine 只作用于一小部分细胞系。不同于现在的DNA合成抑制剂，5 μM PHA-767491 阻断 DNA 复制开始而不是复制叉的进展，归因于Cdc7 激酶和Mcm2 在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化受特定抑制。^[1] 3 μM PHA-767491 处理抗ABT-737的 OCI-LY1 和 SU-DHL-4 细胞，显著降低上调的Mcl-1水平，可能因为 Cdk9受抑制, 导致对ABT-737的敏感性恢复。^[2] 1 μM PHA-767491作用于静态慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞，可观察到直接线粒体依赖性的促凋亡效果，EC50为0.34-0.97 μM。5 μM PHA-767491 处理 CD154 和IL-4刺激的增殖CLL细胞，通过抑制Cdc7而不是触发细胞死亡而废除DNA合成。^[3]
激酶实验	体外激酶实验
激酶实验	使用强阴离子交换实验测定PHA-767491 (IC50)抑制Cdc7 和 Cdk9的情况。对于每种酶，初步确定ATP的绝对K_m值和特定底物，然后在最佳 ATP/³³Pγ-ATP 混合物(2K_m) 和底物 (5K_m) 浓度进行每组实验。在含 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl₂,2 mM β-甘油磷酸, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄,2K_mATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m Mcm2 (aa 10-294), 37 nM 重组Cdc7/Dbf4，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行 Cdc7激酶实验，终体积为 30 μL, 在 25^oC下温育1小时。使用 50 nM 重组 Cdk9/cyclin T 在 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m RNA聚合酶CDT 肽，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行Cdk9激酶反应，终体积为30 μL,在 25^oC下温育1小时。温育后，加入150 μL 树脂/甲酸盐 (pH 3.0)，终止反应，捕获未反应的³³Pγ-ATP, 使其与溶液中磷酸化礼物分离。1小时后，50 μL上清液转移到Optiplate 96 孔板上。加入 150 μL Microscint 40后，在TopCount上计算放射性。
细胞实验	细胞系	HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, 和 NHDF
	浓度	溶于DMSO,终浓度为~ 20 μM
	孵育时间	24 或72 小时
	方法	使用 PHA-767491处理细胞24 或 72小时。裂解细胞，使用耐高温萤火虫荧光素酶实验测定孔中ATP含量，用来衡量存活细胞数。通过含特定促发光底物的荧光素酶实验，测量 caspase-3 和 caspase-7的活化，衡量实验组和对照组的比率。通过流式细胞仪测量DNA复制，衡量核苷酸类似物BrdU渗透进DNA的量。
实验图片	检测方法	检测指标	实验图片	PMID
实验图片	Western blot	p-MCM2 / CDC7 RNA Pol II / p-RNA Pol II / Caspase-3 / PARP / Mcl-1 / XIAP / Bcl-xL / Bcl-2 / NOXA		24902048

体内研究(In Vivo)
体内研究活性	PHA-767491 每天处理两次，持续5天，显著抑制HL60移植瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，按20 mg/kg 和30 mg/kg剂量处理，TGI分别为50% 和92%,这种效果在A2780, Mx-1, 和 HCT-116移植瘤模型和 DMBA诱导的乳腺癌中也很显著, 与Cdc7受抑制相关，随后降低Mcm2在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化。^[1]
动物实验	Animal Models	皮下移植 HL60细胞的雌性SCID小鼠,皮下移植 HCT116细胞,A2780 或Mx-1细胞的雄性Hsd，无胸腺nu-nu 小鼠,和携带DMBA诱导的乳腺癌的雌性Sprague-Dawley大鼠
	Dosages	~50 mg/kg
	Administration	静脉注射或口服处理，每天两次。

参考文献
[1] Montagnoli A, et al. Nat Chem Biol, 2008, 4(6), 357-365. [2] Yecies D, et al. Blood, 2010, 115(16), 3304-3313. [3] Natoni A, et al. Mol Cancer Ther, 2011, 10(9), 1624-1634.

参考文献

化学信息&溶解度

分子量	249.7	分子式	C₁₂H₁₁N₃O.HCl
CAS号	942425-68-5	SDF	Download PHA-767491 HCl SDF
Smiles	C1CNC(=O)C2=C1NC(=C2)C3=CC=NC=C3.Cl
储存条件(自收到货起)	3年-20°C粉状	储备液保存和期限建议分装储备液，避免反复冻融！	1年-80°C溶于溶剂
储存条件(自收到货起)	3年-20°C粉状	储备液保存和期限建议分装储备液，避免反复冻融！	1个月-20°C溶于溶剂

体外溶解度
批次：

DMSO : 24 mg/mL ( (96.11 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

DMSO : 43 mg/mL ( (172.2 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

摩尔浓度计算器

体内溶解度
批次：

现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂

动物体内配方计算器

实验计算

摩尔浓度计算器

质量	浓度	体积	分子量
=	×	×

稀释计算器分子量计算器

动物体内配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg 动物平均体重 g 每只动物给药体积 μL 动物数量只

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH2O

%DMSO+ %

计算结果：

工作液浓度： mg/ml；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；

体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH₂O，混匀澄清。

体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。

注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。

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