AT7519 HCl

AT7519 HCl是一种多重CDK抑制剂,作用于CDK1,2,4,6 和 9,无细胞试验中IC50为10-210 nM。它对CDK3作用较弱,而对CDK7几乎没有活性。Phase 2。

AT7519 HCl Chemical Structure

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CAS: 902135-91-5

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生物活性

产品描述 AT7519 HCl是一种多重CDK抑制剂,作用于CDK1,2,4,6 和 9,无细胞试验中IC50为10-210 nM。它对CDK3作用较弱,而对CDK7几乎没有活性。Phase 2。
靶点
CDK9/CyclinT [1]
(Cell-free assay)
CDK5/p35 [1]
(Cell-free assay)
CDK2/CyclinA [1]
(Cell-free assay)
GSK-3β [1]
(Cell-free assay)
CDK4/CyclinD1 [1]
(Cell-free assay)
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<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
体外研究(In Vitro)
体外研究活性 AT7519是一种ATP竞争性CDK抑制剂,对CDK1的Ki值为38 nM。AT7519对所有非CDK激酶没有活性,除了GSK3β (IC50 = 89 nM)。AT7519在各种人肿瘤细胞系中表现出有效的抗增殖活性,IC50值范围为40 nM(对MCF-7)到940 nM(对SW620),与对CDK1和CDK2的抑制一致。[1] AT7519在多发性骨髓瘤(MM)细胞系中诱导剂量依赖性细胞毒性,在48小时,IC50值范围为0.5到2 μM,最敏感的细胞系为MM.1S (0.5 μM)和U266 (0.5 μM),最耐药的是MM.1R (>2 μM)。它在外周血单核细胞(PBMNC)中不会诱导细胞毒性。AT7519部分抑制IL6和IGF-1诱导的增殖优势,以及骨髓基质细胞(BMSCs)的保护作用。AT7519在丝氨酸2和丝氨酸5位点诱导快速的RNA pol II CTD去磷酸化,并导致转录的抑制,部分有助于AT7519诱导的MM细胞的细胞毒性。AT7519通过下调GSK-3β磷酸化诱导GSK-3β的活化,这也有助于AT7519诱导的独立于转录抑制的细胞凋亡。[2]
激酶实验 体外激酶试验
CDK1,CDK2和GSK3-β的激酶反应都以放射性过滤器结合的形式进行。对CDK5的测定以DELFIA方式进行,CDKs 4和6 的测定以ELISA方式进行。对于CDKs 1和2,相关的CDK和0.12 μg/mL 组蛋白H1在20 mM MOPS,pH 7.2,25 mM β-甘油磷酸,5 mM EDTA,15 mM MgCl2,1 mM 原矾酸钠,1 mM DTT,0.1 mg/mL BSA,45 μM ATP (0.78 Ci/mmol)和不同浓度的AT7519中分别培育2小时和4小时。对于GSK3-β,相关的酶和5 μM糖原合成酶多肽2,以及10 mM MOPS pH 7.0,0.1 mg/mL BSA,0.001% Brij-35,0.5%甘油,0.2 mM EDTA,10 mM MgCl2,0.01% β-巯基乙醇,15 μM ATP (2.31 Ci/mmol)和不同浓度AT7519培育3小时。试验反应通过加入过量正磷酸停止,并使用Millipore MAPH滤板过滤。然后将板清洗,加入闪烁剂,放射性通过在Packard TopCount上闪烁计数测定。对于CDK5,CDK5/p35 和1μM 生物素化的组蛋白H1多肽(生物素-PKTPKKAKKL)在25 mM Tris-HCl,pH 7.5,2.5 mM MgCl2,0.025% Brij-35,0.1 mg/mL BSA,1 mM DTT,15 μM ATP和不同浓度的AT7519下培育30分钟。测定反应使用EDTA停止,转移到Neutravidin涂覆的板,磷酸化的多肽通过兔子磷酸-cdk1底物多克隆抗体和DELFIA铕标记的抗-兔子IgG第二抗体,使用时间分辨荧光(λex=335nm,λem=620nm)定量。对于CDK 4和6的测定,板用GST- pRb769-921涂覆,并用Superblock阻隔。CDK4或 6与15 mM MgCl2,50 mM HEPES,pH 7.4,1 mM DTT,1 mM EGTA,pH 8.0,0.02% Triton X-100,2.5% DMSO和不同浓度AT7519培育,加入ATP起始反应。30分钟后,通过加入0.5 M EDTA pH 8.0停止反应。然后清洗板,并与Superblock中稀释的第一抗体(抗-p-Rb丝氨酸780)培育1小时,随后与第二抗体(碱性磷酸酶相联的抗兔子抗体)再培育1小时。板使用Attophos系统发展,荧光性在Spectramax Gemini酶标仪上以450 nm的激发波长和580 nm的发射波长读取。在所有情况下,IC50值使用GraphPad Prism软件根据重复的曲线计算。
细胞实验 细胞系 MM.1S,MM.1R,RPMI8226,U266,RPMI8266,RPMI-Dox40,OPM1 细胞,原代 MM 细胞和 PBMNCs
浓度 以10 mM的浓度溶解于DMSO,终浓度为0.25-4 μM
孵育时间 24 或 48 小时
方法 细胞与不同浓度的AT7519在37℃下培育24或48小时。细胞活性通过测量3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)染料吸光度评估。DNA合成通过氚化胸腺嘧啶摄取(3H-TdR)测量。细胞凋亡使用Annexin V/PI着色评估。发生细胞凋亡的细胞百分比以早期凋亡(膜联蛋白V阳性细胞)和晚期凋亡(膜联蛋白V阳性和PI-阳性细胞)的总和定义。
体内研究(In Vivo)
体内研究活性 在HCT116和HT29结肠癌异种移植物模型中,AT7519 (9.1 mg/kg)每天两次给药引起早期和晚期皮下注射的肿瘤退化。[1]在人MM异种移植小鼠模型中,AT7519治疗(15 mg/kg)抑制肿瘤生长,并延长小鼠平均整体存活期,这与增加的caspase 3活化相关。[2]
动物实验 Animal Models 皮下接种MM.1S细胞的雄性 SCID 小鼠
Dosages 15 mg/kg/day
Administration i.p.给药
NCT Number Recruitment Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT01183949 Completed
Multiple Myeloma
Astex Pharmaceuticals Inc.|Multiple Myeloma Research Consortium
November 2010 Phase 1|Phase 2

化学信息&溶解度

分子量 418.71 分子式

C16H18Cl3N5O2

CAS号 902135-91-5 SDF Download AT7519 HCl SDF
Smiles C1CNCCC1NC(=O)C2=C(C=NN2)NC(=O)C3=C(C=CC=C3Cl)Cl.Cl
储存条件(自收到货起)

体外溶解度
批次:

DMSO : 52 mg/mL ( (124.19 mM) ;DMSO吸湿会降低化合物溶解度,请使用新开封DMSO)

Water : 43 mg/mL (102.69 mM)

Ethanol : 28 mg/mL (66.87 mM)

摩尔浓度计算器

体内溶解度
批次:

现配现用,请按从左到右的顺序依次添加,澄清后再加入下一溶剂

动物体内配方计算器

实验计算

摩尔浓度计算器

质量 浓度 体积 分子量

动物体内配方计算器(澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)

mg/kg g μL

第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

计算结果:

工作液浓度: mg/ml;

DMSO母液配制方法: mg 药物溶于μL DMSO溶液(母液浓度mg/mL,:如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请先联系Selleck);

体内配方配制方法:μL DMSO母液,加入μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入μL ddH2O,混匀澄清。

体内配方配制方法:μL DMSO母液,加入μL Corn oil,混匀澄清。

注意:1. 首先保证母液是澄清的;
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。

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