TG003
TG003是一种强效的ATP竞争性的Cdc2-like激酶(Clk)抑制剂，作用于Clk1, Clk2,和Clk4时IC50分别为20 nM, 200 nM,和15 nM。对Clk3, SRPK1, SRPK2, 或者PKC无抑制效果。
TG003 Chemical Structure
CAS: 300801-52-9
产品质控
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细胞实验数据示例
| 细胞系 | 实验类型 | 给药浓度 | 孵育时间 | 活性描述 | 文献信息 |
|---|---|---|---|---|---|
| human STO cells | Function assay | Modulation of Clk/sty pre-mRNA splicing in human STO cells assessed as concentration required to increase in mature Clk2 mRNA level by RT-PCR analysis, EC50=6.6 μM | 25221649 | ||
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生物活性
| 产品描述 | TG003是一种强效的ATP竞争性的Cdc2-like激酶(Clk)抑制剂，作用于Clk1, Clk2,和Clk4时IC50分别为20 nM, 200 nM,和15 nM。对Clk3, SRPK1, SRPK2, 或者PKC无抑制效果。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | TG003通过抑制Clk1/Sty介导的磷酸化抑制人类β珠蛋白在体外的SF2/ASF依赖性剪接。TG003抑制哺乳动物细胞中Clk1/Sty激酶活性，而在10μM浓度下对HeLa和COS-7细胞的生长没有毒性作用。[1] TG003通过抑制IL-1β异核RNA的剪接阻断血小板产生IL-1β RNA。[2]在3T3-L1细胞分化时期，TG003也会阻断PKCβII的可变剪接以及PPARγ1和PPARγ2的表达。[3] | |||
|---|---|---|---|---|
| 激酶实验 | 体外激酶试验 | |||
| Clks和SRPKs的激酶活性在包含200 mM Tris-HCl (pH 7.5), 12.5 mM MgCl2, 8 mM dithiothreitol, 4 mM EGTA, 1–20 μM ATP, 1 μCi of [γ-32P]ATP, 1 μg SF2/ASF RS 结构域的 合成肽 (NH2-RSPSYGRSRSRSRSRSRSRSRSNSRSRSY-OH), 以及 0.1–1 μg of 纯净的激酶，终体积为40 μL的反应混合物中被测量。cAMP依赖性蛋白质激酶的活性在包含80 mM Tris-HCl (pH 7.5), 12.5 mM MgCl2, 8 mM 二硫苏糖醇, 4 mM EGTA, 10 μM ATP, 1 μCi [γ-32P]ATP, 5 μg组蛋白H1, 以及1 μg 大鼠cAMP依赖性纯净的蛋白激酶催化亚基的反应混合物中被测量。蛋白激酶C的活性在包含200 mM Tris-HCl (pH 7.5), 12.5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 80 μg/mL 磷脂酰丝氨酸, 8 μg/mL 二油精, 10 μM ATP, 1 μCi [γ-32P]ATP, 5 μg组蛋白H1, 以及 2 μL 部分纯化的大鼠蛋白激酶C的反应混合物中被测量。Me2SO的终浓度被调节至1%，而不考虑抑制剂浓度。反映混合物在30或者25 °C下培养，哺乳动物或者非洲爪蟾重组蛋白分别培养10分钟，并且半份点样在P81磷酸纤维素膜上。使激酶试验的条件，包括培育周期以及激酶和基底的浓度最优化以保持培育期间的线性关系。用5%磷酸溶液(SF2/ASF RS 域)或者5%三氯乙酰溶液(组蛋白 H1)洗涤膜至少15分钟。放射性通过液体闪烁计数器测定。净放射性通过减去没有激酶的反应混合物的基底计数推导出，数据表示成包含溶剂的对照试样的百分数。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | HeLa细胞和COS-7细胞 | ||
| 浓度 | ~10 μM | |||
| 孵育时间 | 3天 | |||
| 方法 | 2 × 105 HeLa细胞或者1.5 × 105 COS-7细胞再悬浮于2 mL培养基中接种于6孔培养皿中，并且2 μL 10 mM TG003溶解在Me2SO (终浓度为 10 μM)，或者2 μL Me2SO加入到一些孔中。细胞用胰蛋白酶处理，3天中每24小时计算一次密度。细胞用1 mL冰预冷的70%乙醇固定，用PBS洗涤，在1 ml包含1 μg/mL DNase-free RNase A和50 μg/mL碘化丙啶的PBS中于37 °C下培养20分钟，进而通过FACSCalibur进行细胞周期分析。 |
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| 实验图片 | 检测方法 | 检测指标 | 实验图片 | PMID |
| Western blot | CLK1 / SRPK1 |
|
27397683 | |
| Immunofluorescence | tubulin / emerin |
|
27015110 | |
| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 | TG003（10μM）能够挽救非洲爪蟾体内过度Clk活性诱导的胚胎缺陷。[1] | |
|---|---|---|
| 动物实验 | Animal Models | 非洲爪蟾胚胎 |
| Dosages | ~10 μM | |
| Administration | -- | |
化学信息&溶解度
| 分子量 | 249.33 | 分子式 | C13H15NO2S |
| CAS号 | 300801-52-9 | SDF | Download TG003 SDF |
| Smiles | CCN1C2=C(C=CC(=C2)OC)SC1=CC(=O)C | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 50 mg/mL ( (200.53 mM) ；DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Ethanol : 50 mg/mL (200.53 mM) Water : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
mg/kg
g
μL
只
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
% DMSO
%
% Tween 80
% ddH2O
%DMSO
%
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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